همسانه سازی و بیان ژن پروتئین پوششی ویروس زردی غربی چغندر درcoli escherichia و آماده سازی آنتی سرم علیه آن

thesis
abstract

ویروس زردی غربی چغندرقند (bwyv) beet western yellows virus یکی از ویروس های مهم بیماری زا در گیاهان می باشد. تشخیص سریع و به موقع این ویروس نقش به سزایی در اتخاذ روش های کنترل و خسارت آن دارد. از روش های متداول، معتبر و ارزان برای تشخیص ویروس در سطح وسیع، روش سرولوژیکی می باشد که در این روش تامین منبع آنتی ژن ویروسی برای استفاده در فرآیند تولید آنتی بادی پلی کلونال ضروری است. در تحقیق حاضر ژن رمزکننده پروتئین پوششی bwyv، جدا شده از ایران (bwyv-cl10)، طی واکنش زنجیره ای پلیمراز (pcr) تکثیر شد و در ناقل بیانی pet26b همسانه سازی گردید و سازه حاصل pet-bwyv-cp نامیده شد. سپس این سازه به سویه بیانی (bl21) باکتری escherichia coli منتقل شد و بیان پروتئین پوششی نوترکیب با iptg القاء گردید. سپس نمونه برداری در ساعات مختلف (2، 4، 6 و 8 ساعت) پس از القاء انجام شد. پروتئین محلول کل استخراج و به کمک الکتروفورز در ژل sds-page تفکیک گردید و باند پروتئین مورد نظر مشاهده شد. صحت پروتئین بیان شده توسط روش لکه گذاری وسترن و با استفاده از آنتی بادی مونوکلونال اختصاصی تولید شده علیه ذرات ویروسی تأیید شد. با الکتروفورز قطعه ژل حاوی پروتئین نوترکیب در کیسه دیالیز این پروتئین خالص سازی گردید و برای حذف بافر الکتروفورز، پروتئین نوترکیب به مدت 24 ساعت علیه آب مقطر دیالیز شد. سپس پروتئین خالص سازی شده با استفاده از دستگاه لیوفیلیزه کننده تغلیظ و به خرگوش جهت تولید آنتی سرم تزریق شد. آنتی سرم تولید شده، پروتئین پوششی نوترکیب را در عصاره باکتری نوترکیب القاء شده و مخلوط با عصاره پروتئینی گیاه کلزا سالم با استفاده از تکنیک وسترن بلات با رقت 1:45000 شناسایی نمود اما واکنش مثبتی با عصاره گیاهان کلزای آلوده مشاهده نشد. نتایج این مطالعه پیشنهاد می کند که تولید آنتی بادی تشخیصی علیه ویروس زردی غربی چغندر بوسیله پروتئین پوششی نوترکیب آسان نیست و نیاز به استراتژی های خاص دارد.

similar resources

آنالیز بیوانفورماتیکی پروتئین مایکوباکتریایی Rv1733c بعنوان کاندیدای واکسن، همسانه سازی و بیان آن در Escherichia coli

از آنجا که تعداد زیادی از جمعیت جهان به صورت نهفته با باسیل سل (Mycobacterium tuberculosis) آلوده هستند، واکسن هایی که سل نهفته را مورد هدف قرار بدهند تاثیر قابل توجهی در کنترل شیوع جهانی سل خواهند داشت. در این پژوهش ابتدا آنالیزهای بیوانفورماتیک روی یک پروتئین مایکوباکتریایی مربوط به فاز نهفته عفونت به نام Rv1733c انجام شد و پیش بینی شد که Rv1733c یک پروتئین غشایی با تعداد زیادی اپیتوپ های سلو...

full text

همسانه سازی و بیان ژن پروتئین نوترکیب ویروس پیچیدگی برگ شلغم (tctv) در باکتری escherichia coli

چکیده ویروس پیچیدگی برگ شلغم ( turnip curly top virus, tctv) یک جمینی ویروسی جدید با ویژگی های منحصر به فرد است که در سال 1389 از ایران (فارس) گزارش شده است. مطالعه ویژگی های بیولوژیکی این ویروس، مستلزم برقراری یک روش ردیابی ویروس در طبیعت است. بدلیل کارائی بهتر روش های سرولوژیکی در شناسایی ویروس های گیاهی، در تحقیق حاضر اقدام به فراهم سازی بستری جهت تولید آنتی بادی و به تبع آن، ردیابی این ویر...

تخلیص و بررسی ویژگی های آنتی ژنیک پروتئین پوششی ویروس موزاییک خیار بیان شده در باکتری Escherichia coli

چکیده تخلیص انواع پروتئین­های بیان شده­ی ویروسی با اهداف مختلف از جمله تولید آنتی­بادی­های چند همسانه­ای و تک همسانه­ای، مطالعه­ی ساختاری آنها، شناسایی توالی آمینو اسیدی و توالی پپتیدی با استفاده از انواع روش­های کروماتوگرافی، صورت می­پذیرد که عموماً کاربرد چنین روش­هایی مستلزم صرف هزینه­ی زیاد می­باشد. در این تحقیق سعی شد پس از بیان ژن پروتئین پوششی ویروس موزاییک خیار، تخلیص و خالص سازی پروتئی...

full text

همسانه سازی، بیان و ارزیابی عملکرد پروتئین شبه الاستین: پروتئین نوین در مهندسی پزشکی

Introduction: Elastin like protein or ELP is a synthetic biopolymer consisting the pentapeptide repeats of VPGXG (X can be any amino acid except Pro). This protein is the thermal responsive polypeptide that undergoes a reversible phase transition. At a temperature below the transition temperature (Tt), ELP molecules assume an extended conformation and thus are soluble in aqueous solution; but u...

full text

وقوع ویروس زردی غربی چغندرقند (BWYV) در مزارع یونجه لرستان و ایلام و تعیین جایگاه تاکسونومی آن بر اساس ژن پروتئین پوششی (CP)

طی دو سال 91-1390، مجموعاً 932 نمونه برگی یونجه با علائم زردی، قرمز شدن برگ‌ها، نکروز و کم‌رشدی از دو استان لرستان و ایلام جمع‌آوری گردید. بر اساس آزمون سرولوژیکی لکه‌گذاری بافتی و بکارگیری پادتن تک همسانه‌ای 5G4 (اختصاصی علیه لوتئوویروس‌ها) 35 درصد نمونه های تصادفی دارای واکنش مثبت بودند. آنالیز مولکولی نشان دهنده آلودگی این نمونه‌ها به ویروس زردی غربی چغندرقند (BWYV) از جنس پولروویروس بود. نمو...

full text

بیان ژن پروتئین پوششی ویروس تریستزای مرکبات در باکتری escherichia coli

ویروس تریستزای مرکبات( citrus tristeza virus ctv) مهمترین بیمارگر مرکبات می باشد و خسارت هنگفتی به صنعت تولید این محصول در دنیا وارد می کند. به دلیل گسترش و شیوع ctv در ایران، مدیریت کنترل آن اهمیت بسزایی یافته است. از این رو تشخیص به موقع، دقیق و ارزان بیماری نیاز به بکارگیری روشی مناسب دارد. امروزه روش( enzyme linked immunosorbant assay elisa) روشی معمول، معتبر و ارزان برای تشخیص ویروس در سطو...

15 صفحه اول

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


document type: thesis

وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه تربیت مدرس - دانشکده کشاورزی

Keywords

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023